تلوين مناعي

الكيمياء النسيجية المناعية

كذلك، إحدى الصعوبات الرئيسية في الكيمياء النسيجية الجزيئية هي الحصول على نواتج نوعية أو غير نوعية. يعد تحسين طرق التثبيت، والمعالجة المسبقة بعوامل الحجب، وتضمين الأجسام المضادة التي تحتوي على نسبة عالية من الملح، عوامل مهمة للحصول على تلوين مناعي عالي الجودة.

من جهة ثانية، يعد تحضير الأنسجة أو تثبيتها أمرًا ضروريًا للحفاظ على شكل الخلية وبنية الأنسجة. قد يؤدي التثبيت غير المناسب أو المطول إلى تقليل قدرة ربط الجسم المضاد بشكل ملحوظ. يمكن تثبيت الكثير من المستضدات بنجاح في الأنسجة المثبتة بالبارافين المخلوط مع الفورمالين. ومع ذلك، فإن بعض هذه المستضدات لن تبقى سليمة حتى عند إضافة كميات معتدلة من مثبت الألدهيد؛ لذلك يجب تجميد الأنسجة بسرعة باستخدام النيتروجين السائل وتقطيعها باستخدام جهاز التبريد. تشمل مساوئ المقاطع المجمدة الشكل قليل الوضوح، وضعف الدقة عند التكبير العالي، وصعوبة قطع مقاطع البارافين، والحاجة إلى التخزين المجمد. أما بالنسبة للمقاطع الاهتزازية فهي لا تتطلب معالجة للأنسجة باستخدام المذيبات العضوية أو الحرارة العالية، والتي يمكن أن تدمر مولد الضد، أو تعطله عندما يذوب بعد التجميد. من أهم مساوئ المقاطع الاهتزازية هي أن عملية التقسيم بطيئة وصعبة عند التعامل مع الأنسجة الرخوة والضعيفة، وأن علامات الخطوط الاهتزازية تكون ظاهرة غالبًا في المقاطع.

ومن جهة أخرى، الكيمياء النسيجية المناعية (أو الكيمياء الخلوية المناعية، وهي تلوين الخلايا) هي أكثر تقنيات التلوين المناعي شيوعًا. استعملت هذه الطريقة في البداية الأصبغة الفلورية (انظر التألق المناعي)، لكنها تستعمل في الوقت الحالي طرق أخرى غير الأصبغة الفلورية، إحداها استخدام الإنزيمات مثل إنزيم البيروكسيداز (انظر التلوين المناعي بالأكسيداز) والفوسفاتاز القلوية. هذه الإنزيمات قادرة على تحفيز التفاعلات التي تعطي نواتج تفاعلية ملونة يمكن اكتشافها بسهولة عن طريق الفحص المجهري الضوئي. يمكن استخدام العناصر المشعة كواسمات، ويمكن مراقبة رد الفعل المناعي عن طريق التصوير الشعاعي الذاتي.

علاوةً على ذلك، يمكن تحسين العثور على الكثير من المستضدات بدرجة كبيرة عن طريق عمليات استرجاع المستضد، وذلك عن طريق كسر بعض الروابط المتقاطعة للبروتين الناتجة عن التثبيت للكشف عن مواقع المستضدات المخفية. يتحقق ذلك عن طريق التسخين لفترات متفاوتة من المرات (استرجاع الحاتمة المستضدية باستخدام الحرارة أو HIER) أو باستخدام هضم الإنزيم (استرجاع الحاتمة المستضدية عن طريق التحلل البروتيني أو PIER).

قياس التدفق الخلوي

في هذا الإطار، يمكن استخدام مقياس التدفق الخلوي للتحليل المباشر للخلايا التي تعبر عن بروتين محدد أو أكثر. تُضاف إلى الخلايا في المحلول مواد مقوية باستخدام طرق مشابهة لتلك المستعملة في التألق المناعي، ليبدأ لاحقًا تحليلها عن طريق قياس التدفق الخلوي.

إضافةً إلى ذلك، يتميز قياس التدفق الخلوي بالعديد من المزايا مقارنة بالكيمياء النسيجية الجزيئية، بما في ذلك: القدرة على تحديد مجموعات الخلايا المتميزة من خلال حجمها وتفصيلها، والقدرة على التخلص من الخلايا الميتة، والحساسية الأفضل، وتحليل متعدد الألوان لقياس عدة مستضدات في وقت واحد. ومع ذلك، قد يكون قياس التدفق الخلوي أقل فعالية في الكشف عن مجموعات الخلايا النادرة جدًا، مع وجود فقد للروابط الهيكلية بسبب غياب التقسيم النسيجي. إضافة إلى العبء المادي الكبير الذي يفرضه شراء جهاز مقياس التدفق الخلوي.