إيكور5

الاستخدامات

وفي هذا الصدد، غالبا ما يستعمل EcoRV لقطع وفتح ناقل بلازميدي لإدخال جين-محل اهتمام أثناء التنسيل الجزيئي، يتم توفير الإنزيم من قبل الكثير من المصنعين ويتطلب ألبيومين المصل البقري ليعمل بشكل صحيح.

البنية

وفي هذا السياق، تم التعرف على بنية هذا الإنزيم والكثير من المطفرات الأخرى، في مركبات مع تسلسللات الدنا التي تقطعها بواسطة علم البلورات السيني.

ومن جهة أخرى، يتكون لب الإنزيم من خمس صحائف بيتا متسلسلة متشابكة على أطرافها لوالب ألفا. اللب متماثل بين جميع نوكليازات الاقتطاع الداخلية من النوع II الأخرى. وله نطاق فرعي مثنوي للنهاية-N مكون من لولب ألفا قصير، وصحيفتا بيتا متسلسلتان ضد متوازيتان ولولب ألفا طويل. يتواجد هذا النطاق الفرعي لدى EcoRV وPvuII فقط.

3’-CTA/TAG-5’

من جهة ثانية، ويقوم بالقص في بين T وA حيث توجد علامة /الحمراء. النهايات كليلة ويمكن ربطها إلى موقع نسخ كليل بسهولة لكن بكفاءة أقل من النهايات اللصوقة.

منوال العمل

وفي هذا السياق، إيكور5 هو انزيم من النوع الثانوي والوحيد من أنواع انزيمات نيوكلياز القطع الداخلي الذي يحرض على حدوث تغييرات بروتينية جزئية كبيرة على مستوى الحمض النووي دنا DNA.

من جهة ثانية، إن ارتباط هذا الإنزيم يحرض حدوث تغيرات في تركيب الحمض النووي دنا DNA، حيث يؤدي ارتباط الانزيم إلى تقوس الحمض النووي بحوالي 50 درجة على وجه التقريب، يؤدي انحناء الحمض النووي DNA إلى تفكيك القواعد النيتروجينية وتوسيع الكهوف الصغيرة الثانوية وضغط الكهوف الرئيسية، وهذا يؤدي إلى كسر رابطة الفوسفوديستر في الموقع الفعال للإنزيم ضمن سلسلة الاعتراف على الحمض النووي دنا مما يؤدي إلى عملية قطع الدنا كما ان هذا الانزيم لا يحتاج إلى تحلل مركب الطاقة ATP.

إضافةً إلى ذلك، آلية عمل إيكور 5 مماثلة لآلية عمل إيكور1 (EcoRI)، حيث أن إيكور 5 يشكل ما يسمى  بالهومودايمر (بروتين) في المحلول قبل ارتباطه ونشاطه بمكانه المحدد على دنا والذي يعرف بسلسلة الاعتراف. بدايةً يرتبط الإنزيم على DNA بشكل ضعيف، ويسير بشكل عشوائي على طول الجزيئات إلى أن يصل إلى مكانه المحدد أي سلسلة الاعتراف على دنا لأن ايكور5 يتمتع بخصوصية عالية تجاه موقعه على DNA.