وصل بديل

اكتشافها

من جهة ثانية، في سنة 1981 وُصف أول مثال للوصل المتبادل في نسخة من جين طبيعي داخلي المنشأ، فقد وجد أن الجين الذي يرمّز الهرمون الدرقي الكالسيتونين يقوم بعملية وصل متبادل في خلايا الثدييات، إذ تحتوي النسخة الأولية من هذا الجين على 6 إكسونات، يحتوي الرنا المرسال المسؤول عن تصنيع الكالسيتونين على الإكسونات من 1 إلى 4، وينتهي بعد تذييل الموقع بعديد الأدينيلات في الإكسون الرابع، ويُنتَج رنا مرسال آخر منه عبر تخطّي الإكسون الرابع، ويكون بذلك يحتوي على الإكسونات من 1 إلى 3 وَ5 وَ6، وهو يرمّز بروتين يُعرف باسم سي جي أر بي (الببتيد المرتبط بجين الكالسيتونين).

من جانب آخر، لوحظ كذلك بعض الأمثلة على الوصل المتبادل في النُّسخ التي ينتجها الجين المسؤول عن ترميز الغلوبولينات المناعية في الثدييات في أوائل ثمانينيات القرن العشرين.

ومن ناحية أخرى، أوّل ما لوحظت عملية الوصل المتبادل في سنة 1977، إذ تُنتج الفيروسات الغدانية خمس نسخ أولية في دورتها الإنتانية قبل انتساخ الحمض النووي الفيروسي، ونسخة أخرى لاحقًا بعد بدء الانتساخ، ويستمر إنتاج هذه النسخ خلال الدورة، ويكون عدد النسخ الإضافية الأولية التي تُنتج في نهاية الدورة كبير، وأكثر بكثير مما يمكن أن يمثله حمض نووي ريبوزي رسول في خلية واحدة.

إضافةً إلى ذلك، وجد الباحثون أن نسخة الحمض النووي الريبوزي الأولية التي تنتجها الفيروسات الغدانية نمط 2 في الطور الأخير تتصل بطرق عديدة مختلفة، مؤدية بذلك إلى إنتاج أحماض نووية ريبوزية رسولة عديدة ترمّز بروتينات فيروسية مختلفة، واحتوت هذه النسخ الأولية على عدة مناطق تحدث فيها عملية تذييل بعديد الأدينيلات، مؤدية للحصول على نهايات 3' مختلفة بدءًا من رنا مرسال واحد.

كذلك، ومنذ ذلك الحين لوحظ بأن عملية الوصل المتبادل منتشرة في كل مكان في حقيقيات النوى، وحقق جين يدعى Dscam موجود عند ذبابة الفاكهة الشائعة الرقم القياسي حتى الآن في عدد عمليات الوصل المتبادل التي يجريها، فهو قادر على إنتاج 38016 نسخة وصلية مختلفة.

الأنماط

كذلك، ترك أو تخطّي الإكسون: في هذه الحالة قد ينفصل إكسون عن النسخة الأولية، وقد يُحتفظ به، وهو النمط الأشيع عند الثدييات في إنتاج الرنا المرسال الأولي.

ومن جهة أخرى، تبادل الأكسونات الحصرية: يُحتفَظ بأحد الإكسونان في الرنا المرسال بعد عملية الوصل، لكن ليس بكِلا الإكسونين.

علاوةً على ذلك، تبديل الموقع القابِل: يُستعمل موقع وصل بديل هو 3' (الموقع القابِل) بدلًا من الحدّ 5' في الإكسون الموافق.

الآلية

صُنّفت خمسة أنماط رئيسية من أنماط الوصل المتبادل هي:

في هذا الإطار، يوجد إضافة لهذه الأنماط الرئيسية لعملية الوصل المتبادل آليتان رئيسيتان كذلك يمكن من خلالهما إنشاء نسخ مختلفة من الرنا المرسال من نفس الجين هما المعزّزات المتعددة ومواقع التذييل بعديد الأدينيلات المختلفة.

يُعتبر النمط الأخير الأندر عند الثدييات.

ومن جهة أخرى، تبديل الموقع المانح: يُستعمل موقع وصل بديل هو الوصلة 5' (الموقع المانح) بدلًا من الحدّ 3' في الإكسون المقابل.

كذلك، تصف هذه النماذج آليات الوصل المتبادل الأساسية، لكنها غير كافية لوصف العمليات المعقدة التي تحدث خلال عملية الوصل المتبادل.

وفي السياق ذاته، الإبقاء على الإنترون: يُمكن فصل سلسلة الإنترون، أو ببساطة الإبقاء عليها، ويختلف هذا عن الاحتفاظ بالإكسون لأن السلسلة الباقية لا تكون مُحاطة بأي إنترون، ويكون الإنترون الباقي في منطقة الترميز، ولذلك سيرمز أحماض أمينية كما تفعل الإكسونات المجاورة، أو أنه سيشكل كود التوقف عن النسخ، أو أنه سيسبب تغير في النمط الناتج، ويؤدي بذلك إلى إنتاج بروتين غير وظيفي.

الأمراض المتعلقة بعملية الوصل المتبادل

في هذا الإطار، يوجد في الواقع نقص في عملية الوصل المتبادل في الخلايا السرطانية مقارنة بالطبيعية، إضافة للاختلافات في أنماط هذه العملية، فمثلًا تحافظ الخلايا السرطانية على مستويات أعلى من الإنترونات، وأقل من الإكسونات، وقد يكون السبب في الاختلافات في عملية الوصل في الخلايا السرطانية هو الطفرات الجسدية في الجينات المسؤولة عن عوامل الوصل، أو التغيرات في فسفرة هذه العوامل داخل الخلايا السرطانية.

وعلى صعيد آخر، أشارت دراسة أجريت في عام 2005 اعتمدت على تحليلات احتمالية بأن أكثر من 60% من الطفرات المسببة للأمراض البشرية تؤثر على عملية الوصل المتبادل، بدلًا من التأثير على سلاسل الترميز، وتشير الدراسات الأحدث إلى أنه قد تتعلّق ثلث الأمراض الوراثية بطريقة ما في عملية الوصل المتبادل، لكن بغض النظر عن النسب المئوية الدقيقة، فإن الأمراض الوراثية المتعلقة بعملية الوصل المتبادل موجودة، والسرطان هو أحد الأمثلة البارزة على الموضوع.

وعلى صعيد آخر، عُثر في نسبة عالية من الخلايا السرطانية على رنا مرسال يقوم بعمليات وصل متبادل غير طبيعية، وكشفت تحليلات تسلسلات الرنا وجود شذوذات في عملية الوصل المتبادل في مسار سرطانات عديدة، لكن من غير المعروف فيما إذا كانت هذه الأنماط الشاذة تسهم في تشكل السرطان، أو أنها مجرد نتيجة للشذوذات الخلوية التي تحدث في سياقه، ولوحظ في أنواع معينة من السرطانات، كسرطانات الكولون، والمستقيم، والبروستات أن الأخطاء في عملية الوصل المتبادل تختلف بدرجة كبيرة بين السرطانات، ويشار إلى هذه الظاهرة بعدم الاستقرار النسخي.

تحليل الجينوم واسع الطيف

وفي السياق ذاته، إن تحليل الجينوم واسع الطيف لعملية الوصل المتبادل مهمة صعبة، لكن تطوّرت الأبحاث التي ستساعد على ذلك، بما فيها التحليلات القائمة على الحمض النووي الميكروبي، والمقايسات المرتبطة بالحمض النووي الريبي، وتقنيات التسلسل العميق، ويمكن استخدام هذه الطرق للبحث عن تعدد الأشكال الظاهرية، والطفرات في أو المتعلقة بعناصر الوصل المتبادل.

في هذا الإطار، استعملت تقنيات التسلسل العميق لإجراء تحليلات واسعة الطيف على الرنا المرسال (المُعالَج، وغير المُعالَج) مما أعطانا معلومات أكثر عن عملية الوصل المتبادل، فمثلًا تشير نتائج التسلسل العميق إلى أنه عند البشر يخضع على وجه التقريب 95% من النسخ المكونة من إكسونات متعددة لعملية الوصل المتبادل.

الآليات العامة لعملية الوصل المتبادل

من جانب آخر، مَثيلة الحمض النووي الريبي وعملية الوصل المتبادل في الحشرات الاجتماعية

وفي هذا السياق، أظهرة مثيلة موقع ثنائي النكليوتيد سي بي جي للحمض النووي دورًا في تنظيم عملية الوصل المتبادل عند الحشرات الاجتماعية، إذ تنظّم هذه المَثيلة عند نحل العسل عملية تخطّي الإكسون بحسب بعض الدراسات الجينية التي أجريت بعد دراسة جينوم هذه الحيوانات.

وفي هذا السياق، عندما يُنتسخ الحمض النووي الريبي الأولي (الرنا المرسال الأولي) من الحمض النووي (الدي إن آي) سيحتوي على الكثير من الإنترونات، والأكسونات (يكون المتوسط عند الديدان الخيطية 4 إلى 5 إكسونات وإنترونات، وفي ذبابة الفاكهة أكثر من 100 إنترون وإكسون في رنا مرسال أولي واحد فقط)، وتُحدّد الإكسونات التي سيُحتفَظ بها من خلال عملية الوصل المتبادل، والمسؤول عن تحديد وتنظيم مواقع الوصل هي متممات محفّزات الوصل، وبروتينات الوصل الكاظمة، إضافة للعناصر المقترنة بالرنا المرسال الأولي نفسها.